3种金缕梅科植物提取物对动物皮肤防护研究

肖伟洪 ，杨春华。，徐秋林 ，吴玉萍

(1．江西省有机功能分子重点实验室，江西南目330013；

2．江西省皮肤病专科医院，江西南目330001；

3．南目市11生防疫站，江西南目330000；

4．江西教育学院化学系，江西南目330006)

    鞣质是金缕梅科植物的主要活性成分。

    鞣质具有收敛性，能凝固微生物的原生质，有一定的抗菌作用，鞣质外用能沉淀蛋白质，用作创面保护药和局部止血药，治疗烧、烫伤，鞣质还能作为生物碱和重金属中毒时的化学解毒剂，它能与这些物质生成沉淀，减少吸收或不被人体吸收。对江西野生金缕梅、槛木和枫香l5j3种金缕梅科植物的乙酸乙酯提取物进行抑菌实验以及对实验动物进行抗炎实验、刺激性试验、过敏试验及防紫外线辐射作用研究还未见报道。作者旨在为开发对皮肤具有抑菌、抗紫外线辐射、抗氧化、镇痛、抗炎症与无刺激和过敏反应等综合防护作用的天然化妆品原料提供实验依据。

1 材料和仪器

    动物：昆明种小鼠(合格证号0219602)，4周龄，平均体重18 g±2 g，由江西医学院动物科学部提供。

   紫外线光源及测试仪器：SHG一250紫外线光纤仪，日本；UVA和UVB双通道紫外辐照计，北京师范大学光电研究所。

   植物来源和提取物：金缕梅由庐山通远植物管理站和江西武宁县野生植物园提供；枫香、槛木采自南昌市郊梅邻山区，由江西科技师范学院李以镔教授、江西农业大学周芝德教授和庐山植物园副馆长鲍海鸥鉴定确定；提取物由研究小组参照文献制备。由于用乙醇提取易发生醇解反应，实验用乙酸乙酯萃取，减压加热回收乙酸乙酯，最后得到有色提取物，稀释液为m(提取物)：m(蒸馏水)=1：20(以下称稀释液)，冷藏保存。

2 方法及结果

2．1 抑菌实验

    试验菌株：金黄色葡萄球菌ATCC6538，大肠埃希氏菌ATCC25922由中国普通微生物菌种保藏中心提供，培养代数6代，抑菌环直径试验结果见表1。

 

2．2 小鼠热板法镇痛实验

   在可调电热恒温水浴锅内放入一大烧杯，使其保持55 ℃ 4-0．5 ℃将健康雌陛小白鼠放人烧杯内，以小白鼠舔后足反应的潜伏期为痛阈指标，观察并记录其发生疼痛反应所需时间。潜伏期小于5 s或大于30 s的小白鼠剔除。选用44只小白鼠，随机分为4组，每组11只，然后各组分别将稀释液和蒸馏水涂于小白鼠四肢1 min，30 min后再测定潜伏期时间，结果见表2。

 

2．3 小鼠耳肿胀法抗炎实验

    选取健康小白鼠44只，雌雄各半，随机分4组，每组11只，用稀释液组为0．2 mL／只，空白组为等量蒸馏水，用二甲苯致炎0．05mL／只。15 min后将小白鼠麻醉处死，剪下双耳用直径6mm打孔器分别在同一部位打下圆耳片，电子天平称重，右耳片重减去左片重即为炎症肿胀度。结果见表3。

 

2．4 急性皮肤刺激性试验

   按文献选用健康家兔为受试对象，随机分4组。皮肤刺激反应评分见表4。

 

2．5 皮肤过敏试验

   方法：250 g～320 g豚鼠40只，均分为4组，所有动物均于实验前24 h脊柱两侧脱毛40 cm2。各组动物的涂稀释液次数均为3次，即脱毛后24 h、6 d、14 d，并以末次涂药后14 d各组动物分别用相应稀释液涂于右侧脱毛区，6 h后去了药物，即刻、12 h、24 h和72 h，动态观察皮肤过敏情况。

结果：各组动物均未出现皮肤水肿，质量分数为

1％的2，4-二硝基氯苯丙酮溶液组有7只动物出现

轻度皮肤红斑，1只出现中度皮肤红斑；其他各组未

见任何皮损。

2．6 防紫外线辐射实验

    利用SHG-250紫外线光纤仪距30 em照射

30 min， (强度254 nln： 1 430μm／cm2， 297 nm：2 200 μm／cm2， 365 nm： 6 800μm／cm2， 420μm/m24 500μm／cm2)诱发小鼠皮肤丙二醛变化，外涂稀释液对脂质过氧化产物—— 丙二醛(加)A)的影响(MDA试剂盒购自南京建成生物工程研究所)见表5。

 

3 讨论

    欧美国家主要致力于北美金缕梅提取物用于过敏皮炎、皮肤病防治、皮肤收敛化妆品应用研究 ，美国食品及药物管理局称之为安全有效的收敛剂”。日本花王公司使用植物金缕梅提取物开发出一种新型“尿不湿”，能够有效地抑制和缓解婴儿发生皮肤斑疹的症状。此实验研究结果提示：我国野生金缕梅、橙木、枫香3种金缕梅科植物的乙酸乙酯提取物抑菌作用与空白组比具有明显差异(P<0．01)，与对照组比较能显著抑制二甲苯对鼠耳肿胀致炎作用(P<0．05)，对炎症的早、中期均有明显的抑制作用，热板法镇痛实验显示能明显延长小鼠痛阈出现的时间(P<0．01)；皮肤刺激反应评分结果表明：无刺激，皮肤过敏试验显示使用对象可不受限制；防紫外线辐射实验表明：能防止Uv照射所致的皮肤红斑等伤害，增加皮肤弹性和平滑度。其综合功效性较功能单一添加剂更为优异，作用机理是含有的活性成分—— 分子质量和分子结构不同植物多酚与皮肤两种主要皮肤蛋白质(胶原质、弹性蛋白)相结合，增加了胶原纤维的化学稳定性和物理稳定性。酶作用(如透明质酸酶、酪氨酸酶)能防止皮肤受各种酶的分解和暴露于紫外线辐射而导致的炎症，减轻脂质过氧化物的堆积，对多种诱变剂(紫外光、化学品等)具多重抑制活性，并能促进生物大分子和细胞的损伤修复。鞣花型单宁聚合物(ellagtaninpolymer)具有非常强的抗过敏性，抑制化学介质如组胺等的释放，从而产生对皮肤抑菌、镇痛、抗炎、抗氧化及减轻紫外线照射引起的自由基损伤等综合防护作用。