使用VITEK检测化妆品中的绿脓杆菌

VITEK是目前世界上最先进、自动化程度最高的细菌鉴定器之一,该系统以每种细菌的微量生化反应为基础,通过自动试卡阅读器按光学扫描原理,定时测定各生长介质中指示剂的显色或浊度反应,形成各自特有的"代谢指纹图谱",通过计算机分析处理,从而获得鉴定[ 1 ] 。具有高度的特异性、敏感性和重复性,操作简便,检测速度快。
然而在未知菌的鉴定中,VITEK系统有时会因为种种因素不能顺利获得鉴定结果,最常见的有"Unidentified Organism
(UIO ,不能鉴定的细菌) 。本文对眼影样品绿脓杆菌检测过程中VITEK的一次不正常判断进行了分析和讨论。
1 　材料与方法
111 　仪器与材料
VITEK- AMS(60 型) (法国生物梅里埃公司) ;培养基、微量生化鉴定管等(北京路桥公司) 。
112 　样品处理及分离
按GB791814 - 87 ,称取10 g 眼影样品入90 ml SCDL P培养液中,于37 ℃培养24 h ,取培养液划线于十六烷三甲基溴化铵平板上,于37 ℃培养24 h。
2 　结果
211 　手工鉴定与仪器鉴定的结果出现差异从十六烷三甲基溴化铵平板上挑取可疑菌落,菌落扁平无定型,向周边扩散或略有蔓延,表面较湿润,菌落呈灰白色,菌苔处色素明显,使培养基呈现蓝绿色。涂片镜检,为革兰阴性杆菌;氧化酶、绿脓色素、明胶液化、硝酸盐还原产气、42 ℃生长实验,结果均为阳性。按照GB791814 - 87 判定为绿脓杆菌。
按VITEK操作手册所述方法,将新鲜培养的该可疑菌以合适浓度接种至GNI 卡,分析结果如表1 所示。
表1 　可疑菌第一次VITEK- AMS 分析结果


VITEK- AMS 判断结果为: Unidentified Organism (不能鉴定的细菌) 。这与手工鉴定的结果产生了差异。
212 可疑菌与标准菌的比对进一步对可疑菌进行分析。将新鲜培养的绿脓杆菌标准菌株(ATCC:27583) 以合适的浓度接种至GNI 卡,分析结果如表2 所示。
表2 　绿脓杆菌标准菌株VITEK- AMS 分析结果


VITEK - AMS 判断结果为: 绿脓杆菌( 系统鉴定值98 %) 。将可疑菌的VITEK 自动生化分析结果与标准菌进行比对,结果表明仅甘露糖发酵(MAN) ,阿拉伯糖发酵(ARA) ,1 %葡萄糖O/ F 实验( GLU) 3 项生化实验的结果存在差异。
213 　手工鉴定与仪器鉴定比对
进一步对以上存在差异的3 项生化反应进行分析。将可疑菌和绿脓杆菌标准菌株手工接种至甘露糖发酵(MAN) 、阿拉伯糖发酵(ARA) 、1 % 葡萄糖O/ F 实验( GLU) 生化管中,结
果如表3 所示。
表3 　可疑菌和绿脓杆菌标准菌株手工及仪器生化分析结果


表3 显示,该可疑菌仪器生化分析的结果与其他各项存在差异,可能是VITEK在扫描过程中出现了不正常读数。
214 　仪器鉴定平行比对将新鲜培养的该可疑菌再次以合适浓度接种至GNI 卡进行VITEK自动生化分析,结果与绿脓杆菌标准菌株的各项生化反应完全符合,VITEK - AMS 最后的鉴定结果为:绿脓杆菌(系统鉴定值98 %) 。这再次表明,VITEK在上次分析过程中确实出现了不正常读数,甘露糖发酵(MAN) 、阿拉伯糖发酵(ARA) 、1 % 葡萄糖O/ F 实验( GLU) 3 项生化实验的结果发生了偏差,从而导致无法对可疑菌作出准确判断,出现了UIO 的情况。
3 　讨论
VITEK虽然准确性与可靠性很高,已被许多国家定为细菌鉴定仪器,但是其鉴定结果受到多种因素的影响,仍有一些待检菌经VITEK 鉴定后报告为UIO。原因包括:待检菌不纯;接种浊度不合要求;接种物孵育时间过长;超出试验卡鉴定范围;菌悬液不乳化;冲液时气泡过多等[ 2 ] 。除以上原因外,还有一些不能确定的因素也可导致UIO 的出现,本文所描述的就属于这种情况。这说明VITEK 仪器确实存在着一定几率的不正常鉴定的情况,尽管这种几率是非常低的。因此,在实际检测工作中,应注意:
(1) 加强对仪器原理的理解,严格按照VITEK 操作手册
所述方法进行实验,防止因为可以避免的原因而导致不正常
结果。
(2) 检验人员应加强微生物基础知识与技能的培养,对仪
器鉴定结果加以科学分析,建立切实可行的仪器与手工方法
相结合的细菌鉴定方法。
(3) 做好室内质控工作,在分析过程中运用阳性对照加以
比对。
(4) 必要时应进行手工鉴定与机器鉴定的比对,手工鉴定
的平行比对,或机器鉴定的平行比对,以获得准确的分析结
果。
(5) 分析上述比对结果,对仪器鉴定所得的某些生化反应
项的结果进行必要、合理的修改,有时可帮助仪器获得正确结
果。
(6) 定期利用标准菌株对分析仪器进行自校及维护保养,
保证其良好的工作状态及结果的准确性。