我国化妆品微生物检测若干问题的探讨

郭润霞　鲁　波
　　近年来,各地卫生检测机构对化妆品微生物检测问题,陆续做了不少的报道和讨论。为了今后更好地开展化妆品微生物检测工作,并为《化妆品卫生规范》的修订提供参考,现将有关问题加以综述。
1 　化妆品微生物指标的重要性和局限性
        各地卫生检测机构历年来对化妆品微生物检测的结果表明,微生物指标存在着一定比例的超标率是普遍的问题,微生物超标是化妆品合格与否的主要影响因素。总的趋势是化妆品微生物指标的合格率在逐年上升,这无疑与卫生监督的作用密不可分。
1        987～2002 年间,部分省市卫生监督机构先后对连续监测5～12 年的资料进行了分析。广东省卫生防疫站对2574 份化妆品的检测结果显示[ 1 ] ,微生物指标合格率平均为91 %;其中细菌总数为91 % ,粪大肠菌群、绿脓杆菌和金黄色葡萄球菌为99 %～100 %。山西省疾病预防控制中心对686 份化妆品的检测[ 2 ] , 微生物指标合格率由早期的68 % 逐年上升至100 % ,平均为86 %;其中细菌总数为86 % ,粪大肠菌群、绿脓杆菌和金黄色葡萄球菌为98 %～99 %。江西省疾病预防控制中心对937 份化妆品的检测[ 3 ] ,微生物指标合格率平均为91 %;其中细菌总数为94 % ,粪大肠菌群、致病菌、霉菌和酵母菌为98 %～99 %。武汉市卫生防疫站对632 份化妆品的检测[ 4 ] ,微生物指标合格率平均在93 %～98 %;不合格的绝大多数是细菌总数超标,较少检出致病菌。沈阳市疾病预防控制中心对767 份化妆品的检测[ 5 ] ,微生物指标合格率在95 %～98 % 之间,平均为96 %。天津市卫生防病中心对1 899 份化妆品检测结果进行分析[ 6 ] ,微生物指标合格率平均为92 %;其中细菌总数超标率最高,占不合格数的78 %。同时对1990 年开始执行《化妆品卫生监督条例》前后进行比较,实施前694
份化妆品的微生物指标合格率为87 % ,实施后1 205 份化妆品的微生物指标合格率上升为95 %。根据浙江省卫生防疫站对338 份化妆品的检测[ 7 ] ,霉菌和酵母菌检出率为4 %。由此可见,各地抽检的化妆品微生物指标不合格的,主要是细菌总数超标,其次是粪大肠菌群、霉菌和酵母菌,较少检出国家标准监控的致病菌。化妆品微生物检测在化妆品卫生监督中起着举足轻重的作用,为了保证化妆品的卫生质量,必须严格监测微生物指标。
        此外,石家庄市卫生防疫站报道[ 8 ] ,在化妆品中检出了除金黄色葡萄球菌外的其它革兰阳性葡萄球菌,并具有致病性球菌表皮剥脱性毒素;天津市卫生防病中心报道[ 9 ] ,检出白色念珠菌;徐州市卫生防疫站报道[ 10 ] ,检出恶臭假单胞菌,该菌系条件致病菌,在美国属于化妆品微生物监测指标。这些非国家标准监控的致病菌检出,反映出现有化妆品国家标准监控的致病菌种类有一定的局限性。所以,即使在现有的标准所规定的化妆品微生物指标100 % 合格情况下,也不能排除潜在的某些致病菌的污染。正如1990 年全国化妆品基本卫生状况调查所发现的,15 个省市130 家医院接诊由化妆品引起不良反应的病例有1 786例,而当时化妆品的合格率均在90 % 以上,说明化妆品中存在着标准规定检测项目以外的物质或致病菌污染,以致于产生不良反应[ 11 ] 。尽管如此,依据现有的标准所规定的检测和评价方法,虽然不能完全代表环境中所有微生物,还是可以保证化妆品的基本卫生质量。
2 　化妆品添加防腐剂对微生物检测的影响
        化妆品添加防腐剂,必须强调其正当使用。化妆品的微生物污染,在制造过程中发生的称为一次性污染,在消费者使用过程中发生的称为二次性污染。一次性污染要采取完全清洁状态的制造方法来避免;二次性污染主要依靠防腐剂来防止[ 12 ] 。由此可见,化妆品添加防腐剂是为了防止二次性污染,而不是被用来掩盖非清洁状态下制造所产生的一次性污染。
        广东省卫生监督所[ 13 ]对化妆品生产企业进行了防腐剂使用情况调查,91 家生产企业使用了19 种防腐剂。在669 种化妆品中,加入一种防腐剂的占52 % ,加入2 种或2 种以上的占44 % ,防腐剂和增效剂同时使用的占3 %。四川省卫生防疫站[ 14 ]对1996～2001 年间存放留样329 份进行了微生物复检,发现超标率随存放时间递增。存放1～2 年的未发现超标,存放3 年的超标率为119 % ,4 年的317 % ,5 年的718 % ,6 年的818 %。说明防腐剂的作用在逐年衰减。广州市卫生防疫站[ 15 ]对1989～1995 年间的化妆品监督抽检留样241 份进行复检,其中存放3 年以内的微生物复检超标率为018 % ,3 年以上的518 %。值得注意的是,微生物合格的留样在复检中可成为超标的,而微生物超标的留样在复检中可成为合格的,如此互相转化的原因是化妆品添加防腐剂对微生物检测的影响。
        江苏省疾病预防控制中心的实验证明[ 16 ] ,金黄色葡萄球菌在无防腐剂的化妆品中菌数减少比较缓慢,在有防腐剂的化妆品中菌数迅速递减,存活期限只有7 d ,所以送检样品不易检出金黄色葡萄球菌;粪大肠菌群在普通乳糖胆盐培养基中检出率较低,加入卵磷脂、吐温80 中和剂后,检出率有所提高。河南省卫生防疫站的经验认为[ 17 ] ,由于增菌培养基中的中和剂不能完全中和化妆品中的抑菌物质,其中的致病菌也就不能获得有效生长。因此在日常检测中,当加样增菌后出现疑似混浊、沉淀和菌膜者,均应进行致病菌分离培养,以免漏检。可见,在提高化妆品微生物检测的灵敏度方面,寻求如何消除化妆品中防腐剂抑菌作用的方法至关重要。
        确认防腐剂对接种的微生物减灭效果的方法有挑战试验即接种试验,真菌每1 g 制品中接种1 ×105 个,细菌每1 g 制品中接种1 ×106 个,观察1～28 d[ 12 ] 。浙江省丽水地区卫生防疫站曾进行过细菌在化妆品中存活时间的实验研究[ 18 ] ,实验组粪大肠菌群和绿脓杆菌的平均存活时间为4 d ,金黄色葡萄球菌的平均存活时间为10 h ;对照组分别为10 d 以上和5 d。金黄色葡萄球菌的存活时间与上面提到的江苏省疾病预防控制中心实验结果相比差距很大,说明可能由于化妆品种类不同、添加的防腐剂类型及其用量不同而出现不同结果。
        此外,防腐剂在不同类型化妆品中的稳定性及降解率也直接关系其抑菌效应。无论如何,从卫生监督角度出发,在化妆品微生物检测中应当充分使用中和剂,旨在抵消防腐剂的抑菌作用,还其本来面目,暴露其一次性污染状态,这对于防止滥用防腐剂以及促进清洁生产均属必要。同时,如何开发除卵磷脂、吐温80 以外的新型中和剂,以便充分抵消防腐剂的抑菌作用,也是一项迫切的课题。
3 　化妆品微生物检测方法的完善
        一些卫生检测机构为了提高化妆品微生物检测的准确度,在实践中发现了《化妆品卫生规范》中检测方法的一些细节问题不够完善,提出了补充建议。
311 　增加空白对照
        河南省卫生防疫站认为,测定细菌总数时,将空白对照由1 个增至2 个,使空白对照的数量与样品每个稀释度测定的平板数量一致。如此可以更好地反映本底(无样品) 的细菌数量,进而更加准确地测定样品的细菌总数[ 17 ] 。霉菌和酵母菌的检测也应有空白对照,通常环境中常有较多的霉菌和酵母菌存在,加上它们的培养时间较长(72 h) ,因此在检测过程中很容易被污染, 设置空白对照可以发现这个问题, 减少误差[ 19 ] 。
312 　改进细菌总数的报告方式
        河南省卫生防疫站建议[ 19 ] ,对1∶10稀释的检样,其两个平行的培养基上形成的菌落在扣除空白对照的菌落数之后分别为1 和0 时, 《化妆品卫生规范》中未规定其报告方式,遇到这种情况时报告为< 10 cfu/ g(ml) 比较妥当。
313 　取消粪大肠菌群的靛基质试验
        重庆市疾病预防控制中心微生物检验科提出[ 20 ] ,粪大肠菌群作为粪便新近污染的指示菌,它的定义是指一群需氧或兼性厌氧、在4415 ℃ 培养24～48 h 能发酵乳糖产酸产气的革兰阴性无芽胞杆菌。符合该定义的有大肠埃希菌Ⅰ型和Ⅳ型、产气克雷伯菌Ⅳ型,但大肠埃希菌Ⅳ型和产气克雷伯氏菌Ⅳ型均属于靛基质试验阴性的粪大肠菌群,如果加做靛基质试验将把它们排除。因此建议检测粪大肠菌群时不应加做靛基质试验,与饮用水卫生微生物检测方法保持一致。
314 　强调检测细菌总数的培养基加显色剂
        河南省卫生防疫站在进行化妆品微生物检验室间质量控制及参控人员素质分析后,发现专业人员报告细菌总数结果的变异系数较大,原因是培养基中没有加TTC(2 ,3 ,5 - 氯化三苯基四氮唑) 溶液,部分人员将化妆品颗粒与菌落混淆,计数不准确,导致细菌总数的结果误差较大。因此建议必须明确规定,在卵磷脂- 吐温80 营养琼脂中加入定量的TTC 显色剂,以降低检测误差[ 21 ] 。
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