化妆品微生物学检验指标与方法新探讨

作者:符晓梅,杭万双,陈太基
【关键词】　化妆品;微生物学;检验　

　化妆品卫生质量长期以来一直被人们所重视,尤其是微生物学检验指标与方法不断被研究。随着近几年化妆品检验水平逐渐提高,我们对化妆品检验指标方面的一些问题,如指标菌和控制菌、二次污染、中和剂、细菌存活期等等比较关注,并做了一些探讨,现介绍如下。

1　化妆品微生物学检验指标

1.1　指标菌和控制菌
　常用的指标菌和控制菌包括:需氧菌菌落总数、粪大肠菌群(或总大肠菌群)、绿脓假单胞菌、金黄色葡萄球菌等。目前指标菌和控制菌有增加趋势,例如,美国规定控制菌除假单胞菌属细菌外,还有沙门菌、克雷伯菌等。我国和阿根廷、日本都增加了霉菌和酵母菌计数[1]。
1.2　亚硫酸盐还原梭菌
　亚硫酸盐还原梭菌(代表菌种为产气荚膜杆菌)能将亚硫酸盐还原为硫化物。如在检样中大量检出,表示该检品曾受粪便污染,但可能不是新近污染。有试验还报道,在外环境中该类菌的抵抗力与隐孢子虫卵囊和肠道病毒相似,因此考虑这类菌是否可作为病毒和寄生虫卵的指标菌[2]。
1.3　表皮剥脱性毒素
　表皮剥脱性毒素能引起皮肤烫伤综合症,又称剥脱性皮炎。有人试验将护肤类化妆品检出的革兰阳性球菌做皮肤毒性试验,24小时观察其皮肤反应,将引起皮肤烫伤综合症的菌株,再用葡萄球菌鉴定试剂盒进行复核鉴定。结果发现除金黄色葡萄球菌外,尚有松鼠、科氏等葡萄球菌中的少数菌种可引起皮肤病变[3]。

2　与微生物有关问题

2.1　微生物二次污染研究
　有研究报道,使用中的眼部化妆品比使用前污染的严重。研究表明,护肤品最易受霉菌污染。睫毛膏使用前污染率为1.5%、使用中污染率上升为60%;使用前大肠菌群>100ＣＦＵ/ｇ者占10%,而使用中上升至20%,包装是否科学是影响污染因素之一[2]。
2.2　中和剂的研究
　检测大肠群菌用普通乳糖胆盐培养基,其中未加中和剂检出率可能较低,而在基础培养基上加卵磷脂和吐温检出率有所提高。吐温-80和卵磷脂配合,可以中和常用化妆品中的防腐剂,如尼泊金类、苯甲酸类、六氯酚类等,其他类化妆品中的防腐剂是否能被有效中和还需进一步研究[4]。
2.3　微生物存活期的研究
　有人对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、白色念珠菌、黑曲霉菌进行14天观察,结果发现大肠杆菌、白色念珠菌在不含防腐剂化妆品中,随着放置时间延长菌量增加,金黄色葡萄球菌、黑曲霉随放置时间延长菌量减少。金黄色葡萄球菌在含防腐剂化妆品中经过7天观察从106降为0。说明金黄色葡萄球菌在加有防腐剂的化妆品中不易存活[5]。

3　常见种类化妆品卫生学问题

3.1　粉霜类化妆品
　据报道粉霜类化妆品中需氧芽孢杆菌的检出率可高达87.80%,表明该类化妆品易被需氧芽孢杆菌严重污染。一般认为,需氧芽孢杆菌中的蜡状芽孢杆菌检出率为19.51%时,可引起感染。故有人建议,粉霜类化妆品中需氧芽孢和蜡状芽孢杆菌的检验是对其进行监测重要手段[6]。
3.2　香水类化妆品
　香水中的酒精浓度可有效抑制霉菌和酵母菌的生长。我们曾对市售3种品牌香水在检出样品中加104污染菌,放置24小时,霉菌和酵母菌仍达到卫生要求[4]。但在酒精含量降低、污染量大、菌株耐酒精作用强时,香水类化妆品可有霉菌和酵母菌生长。日常监测,从部分香水中检出霉菌和酵母菌,也说明香水中高含量酒精抑制霉菌和酵母菌生长的作用并不绝对[2]。
3.3　含抗菌剂化妆品
　目前有人应用人体试验做含抗菌剂化妆品的抗菌效果研究。方法是,选择健康人群为受试者,在其前臂掌面涂抹试验样品。6小时或12小时后,用灭菌滤纸片蘸酒精贴到涂抹样品部位,同时另取一张蘸酒精纸片贴到未涂抹试验样品部位作对照。取下滤纸片,放入无菌柜挥发至干。然后将表皮葡萄球菌的24小时肉汤培养物用生理盐水稀释100倍,取1ｍｌ加到营养琼脂培养基中,制成平板。将滤纸片贴到平板中央,置37℃培养48小时,观察抑菌效果。

4　重要的检验

4.1　防腐效力检验
　防腐效力检验是化妆品被审批时必须做的检测。其实验方法有多种。例如,英国药典试验法、美国药典法、ＣＴＦＡ试验法、快速筛选试验、ＳＣ法、ＦＤＡ试验法等等。其中快速筛选试验(ＲＳｔｅｓｔ)较为实用,介绍如下。菌种及接种量:Ｅ.Ｃｏｌｉ/ＡＴＣＣ/871.4×106ＣＦＵ/ｇ(ｍｌ);绿脓假单胞菌/ＡＴＣＣ/90270.8×106ＣＦＵ/ｇ(ｍｌ);金黄色葡萄球菌ＡＴＣＣ/65381.45×106ＣＦＵ/ｇ(ｍｌ);Ｃｅｐａｃｉａ假单胞菌/1.75×105ＣＦＵ/ｇ(ｍｌ);假单胞菌株/Ｇ3.3×106ＣＦＵ/ｇ(ｍｌ);阴沟肠杆菌(ｃｏｌａｃａｅ)2.95×106ＣＦＵ/ｇ(ｍｌ);酵母菌和霉菌用ＡＴＣＣ/102316.2×103ＣＦＵ/ｇ(ｍｌ);Ｐａｉａｐｓｉｌｏｓｉｓ念珠菌5.35×103ＣＦＵ/ｇ(ｍｌ);黑曲霉/ＡＴＣＣ/96425.24×103ＣＦＵ/ｇ(ｍｌ)。细菌37℃,真菌30℃分别培养培养3天和7天。防腐效果评定:在7天后细菌数减少99.9%或酵母菌和霉菌数减少90%的化妆品配方,再接种0.ｌｍｌ绿脓假单胞菌肉汤培养液,使其含菌浓度为100000ＣＦＵ/ｇ,再培养3天后,取ｌｇ实验样品检验,如检不出绿脓杆菌,则认为有防腐作用[1]。
4.2　应用检验
　经过防腐效力实验化妆品还须进行使用试验,即选择志愿者模拟消费者使用化妆品。方法是使用者用洗净的手指在腋下抹一下后,立刻用手指去涂抹搅拌化妆品,并将手指上多余的化妆品抹回瓶边,每天如此进行。在试验的第1、4和8天,各取样1ｇ,稀释后取0.2ｍｌ,分别划线接种在相应的指示菌琼脂培养基上(每种培养基均加有卵磷脂和吐温80),30℃培养后,做活菌计数,并进行鉴定。
评价标准:
①细菌总数和酵母菌、霉菌总数≤102ＣＦＵ/ｇ,且未检出指示菌,为防腐效果好;
②细菌总数和酵母菌、霉菌总数≤103ＣＦＵ/ｇ,且未检出指示菌,为刚达到防腐效果;
③细菌总数和酵母菌、霉菌总数>103ＣＦＵ/ｇ,且检出指示菌,为无防腐效果。

[参考文献]

[1]　周淑玉 化妆品微生物检验进展概况 全国化妆品卫生检验学术研讨会论文集[Ｃ] 1998
[2]　李霞 香水类化妆品微生物污染调查报告 全国化妆品卫生检验学术研讨会论文集[Ｃ],2001
[3]　王苋.化妆品中致病性球菌表皮剥脱性毒素的研究[Ｊ].中国卫生检验杂志,2000,10(4):139
[4]　符晓梅.化妆品卫生微生物检验方法探讨[Ｊ].环境与健康杂志,2002,(5)9:397.
[5]　符晓梅.两种方法测定化妆品防腐剂抑菌效果及评价[Ｊ].环境与健康杂志,2000,(5)5:167
[6]　鲁波 化妆品微生物二次污染状况调查 全国化妆品卫生检验学术研讨会的论文集[Ｃ] 2001